2.6 تجزیه و تحلیل HPLC/DAD ترکیبات فنلی
آنالیزهای HPLC/DAD با استفاده از سیستم HPLC Hewlett-Packard (سری Agilent 1100، Waldbronn، آلمان) مجهز به پمپ چهارتایی (G1311A) با گاز زدایی آنلاین، نمونه‌بر خودکار، اجاق ستونی و آشکارساز UV/VIS آرایه دیود انجام شد.
DAD)، اسکن از 200 تا 800 نانومتر و سپس طول موج انتخاب و در 210 و 280 نانومتر ثابت شد طرز تهیه زیتون سیاه، زیرا بسیاری از پیک‌ها فقط در این شرایط یافت می‌شوند.
ستون C18 فاز معکوس غیر قطبی (250.0 میلی متر × 4.6 میلی متر، اندازه ذرات 5 میکرومتر) برای تجزیه و تحلیل HPLC استفاده شد. شستشو در دمای اتاق انجام شد و از 0.05٪ (v/v) اسید فسفریک در آب به عنوان حلال A و استونیتریل (100٪) به عنوان حلال B استفاده شد.
برنامه گرادیان شستشو به شرح زیر است: 5.0٪ B (0-5 دقیقه) بهترین زمان مصرف پودر سنجد، 5.0٪ B تا 33.0٪ B (5-30 دقیقه)، 33.0٪ B تا 100.0٪ B (30-40 دقیقه)، 100.0٪ B (40-45 دقیقه)، با سرعت جریان 1 میلی لیتر در دقیقه. حجم تزریق 20 میکرولیتر بود.
شناسایی ترکیبات فنلی با مقایسه زمان‌های ماند با ترکیبات استاندارد و با ثبت طیف UV نواحی پیک از کروماتوگرام‌ها انجام شد.
کمی سازی ترکیبات فنلی فردی با استفاده از روش کالیبراسیون خارجی انجام شد. داده ها به صورت میلی گرم فنل در 100 گرم نمونه بدون چربی بیان شد.
2.7 فعالیت مهار کاتیون رادیکال ABTS
از روش ABTS همانطور که توسط Re و همکارانش توضیح داده شد استفاده شد. [34] با تغییرات جزئی. کاتیون رادیکال ABTS (ABTS•+) با واکنش محلول 2 میلی مولار ABTS (2، 2′-azino-bis 3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) با 70 میلی مولار پرسولفات پتاسیم تولید شد.
مخلوط قبل از استفاده در تاریکی در دمای اتاق به مدت 24 ساعت نگهداری شد. محلول سالین بافر فسفات (PBS) در pH 7.4 برای رقیق کردن محلول ABTS•+ تا جذب اولیه 0.020±0.700 در 734 نانومتر استفاده شد.
پس از افزودن 10 میکرولیتر عصاره یا استاندارد Trolox به 2 میلی لیتر محلول رقیق شده ABTS•+ ماهی قزل آلا، جذب در λ=734 نانومتر 5 دقیقه پس از اختلاط اولیه اندازه گیری شد.
کاهش در چگالی نوری برای محاسبه درصد بازدارندگی در غلظت‌های مختلف استفاده شد. فرمول اعمال شده به صورت زیر است:
که در آن OD چگالی نوری است (OD0 در زمان اولیه و OD در زمان نهایی). درصد مهار به عنوان تابعی از غلظت عصاره ها و ترولوکس برای داده های مرجع استاندارد رسم شد.
ظرفیت آنتی اکسیدانی بر حسب TEAC (ظرفیت آنتی اکسیدانی معادل ترولاکس) که به عنوان معادل ترولوکس mM (mM TE) بیان می شود میوه آرایی سیب، محاسبه شد. اندازه گیری ها در سه تکرار انجام شد.
- منابع:
- تبلیغات:
